Kitt tad-Demm PCR Dirett

Amplifikazzjoni rapida tal-ġene fil-mira billi tuża direttament id-demm bħala mudell mingħajr estrazzjoni.

Dan il-kit jadotta DNA polymerase ta 'anti-inibitur ta' inġinerija ġenetika biex jamplifika b'mod effiċjenti ġeni ta 'kopja waħda fil-ġenoma umana. Is-sistema buffer ottimizzata sew f'dan il-kitt tgħin lill-polimerasi tirreżisti bil-qawwa l-inibizzjoni ta 'inibituri tal-PCR, u b'hekk tista' tkabbar direttament id-DNA billi tuża demm u ċelloli kkultivati ​​bħala mudelli. Dan il-prodott huwa faċli biex jopera u ma jeħtieġx passi kkumplikati bħal purifikazzjoni tad-DNA jew trattament minn qabel tal-kampjun.
Dan il-kit huwa pprovdut bħala 2 × MasterMix, u r-reazzjoni tista 'ssir billi sempliċement iżżid il-mudell tad-demm u l-primers ta' skoperta korrispondenti. Jista 'jiġi applikat fuq ċelloli kkultivati ​​ta' mammiferi bħal bnedmin, ġrieden, ħnieżer, baqar u speċi oħra, kif ukoll demm sħiħ frisk jew 4 ℃ krijopreservat, antikoagulanti (EDTA, ċitrat, eparina), emboli tad-demm likwifikat u tikek tad-demm niexfa maħżuna fuq kards kummerċjali Whatman 903 u FTA Elute.

Kat. Le Daqs tal-Ippakkjar
4992529 20 µl × 100 rxn
4992530 20 µl × 500 rxn

Dettall tal-Prodott

Eżempju Sperimentali

FAQ

Tags tal-Prodott

Karatteristiċi

■ Sempliċi u veloċi: L-amplifikazzjoni tal-PCR tista 'ssir direttament bl-użu tad-demm bħala mudell, mingħajr il-ħtieġa għall-passi tedjanti tal-preparazzjoni tal-kampjun u l-estrazzjoni tad-DNA.
■ Purità għolja: Il-qbiż ta 'trattament minn qabel tal-kampjun u l-passi ta' estrazzjoni tad-DNA jistgħu jgħinu biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni inkroċjata tal-kampjuni.
■ Produzzjoni għolja: L-identifikazzjoni tal-PCR għal kampjuni fuq skala kbira tista 'titwettaq billi tgħaqqad il-kit ma' pjanċi PCR ta '96/384-well.
■ Universalità qawwija: Dan il-kit jista 'jkabbar b'mod effiċjenti frammenti ta' GC għoljin jew frammenti bi struttura sekondarja kumplessa, u t-tul ta 'amplifikazzjoni jista' jkun sa 5 kb.
■ Reżistenza qawwija għall-istress: Dan il-kit jista 'jiġi applikat għal diversi speċi u kampjuni tad-demm ippreservati b'modi differenti.

Applikazzjonijiet

Il-prodotti PCR ta 'dan il-kitt fihom "A" fit-tarf 3', li jistgħu jintużaw direttament għall-ikklonjar ta' vetturi TA. Dan il-kit jista 'jintuża għall-amplifikazzjoni ta' frammenti ta 'DNA ġenomiċi, analiżi ġenetika ta' fluss għoli u analiżi tal-ġenotipar (bħal sejbien tal-ġeni).

Il-prodotti kollha jistgħu jiġu personalizzati għal ODM / OEM. Għad-dettalji,jekk jogħġbok ikklikkja Servizz Personalizzat (ODM / OEM)


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Bl-użu ta ’antikoagulazzjoni EDTA umana bħala mudell, 4 ġeni b’kontenuti differenti ta’ GC ġew amplifikati permezz ta ’Blood PCR Kit. Is-sistema ta 'reazzjoni PCR kienet 20 μl, u 1 μl demm intuża bħala mudell.
    M: TIANGEN Marker II; 1: Daqs tal-framment 1090 bp, kontenut GC 68.1%; 2: Daqs tal-framment 1915 bp, kontenut GC 70.4%; 3: Daqs tal-framment 448 bp, kontenut GC 74.8%; 4: Daqs tal-framment 1527 bp, kontenut GC 61.5%.
    Riżultati sperimentali: Blood Direct PCR Kit jista 'effettivament jamplifika frammenti tad-DNA b'kontenut ta' GC fil-medda ta '61.5% -74.8%, u jissuġġerixxi li huwa kapaċi jkabbar frammenti ta' GC għolja.
    Experimental Example Bl-użu ta 'antikoagulazzjoni EDTA umana bħala mudell, 5 ġeni b'tulijiet differenti (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 u Hn4.0) ġew amplifikati permezz ta' Blood PCR Kit. Is-sistema ta 'reazzjoni PCR kienet 20 μl, u 1 μl demm intuża bħala mudell.
    M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 kampjuni tad-demm differenti; NTC: kontroll mingħajr primers. Riżultati sperimentali: Il-Kitt tal-PCR tad-Demm Dirett jista 'jkabbar frammenti bit-tul sa 4 kb, u jissuġġerixxi li huwa kapaċi jkabbar frammenti twal.
    Experimental Example Bl-użu ta 'anti-koagulazzjoni EDTA umana bħala mudell, Blood Direct PCR Kit intuża għal sejbien PCR ta' kampjuni ta 'demm differenti. Is-sistema ta 'reazzjoni PCR kienet 20 μl, u 1 μl demm intuża bħala mudell.
    M: TIANGEN Marker II; 1-9: l-ammont ta 'tagħbija ta' demm huwa 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl u 5 μl, rispettivament; NTC: kontroll mingħajr mudell
    Riżultati sperimentali: Blood Direct PCR Kit għandu reżistenza qawwija għad-demm u jista 'jkabbar il-kampjuni tad-demm bil-firxa tat-tagħbija ta' 0.1-5 μl.
    Experimental Example Kampjuni tad-demm minn bniedem, far, tiġieġ u speċi oħra bi trattamenti differenti ntużaw bħala mudelli. Blood Direct PCR Kit intuża biex jamplifika PRNP (uman, 750 bp), Actin (far, 200 bp), u β-Actin (Chicken, 1.0 kb). Is-sistema ta 'reazzjoni PCR kienet 20 μl, u 1 μl demm intuża bħala mudell. M: TIANGEN Marker II.
    Riżultati sperimentali: Il-Kitt tal-PCR tad-Demm Dirett jista 'jiġi applikat fuq firxa wiesgħa ta' kampjuni, u l-iskoperta diretta tal-PCR tista 'ssir fuq kampjuni tad-demm minn diversi speċi bi trattamenti differenti.
    Q: L-ebda faxxa ta 'amplifikazzjoni

    Mudell A-1

    ■ Il-mudell fih impuritajiet tal-proteini jew inibituri tat-Taq, eċċ. ——Purifika l-mudell tad-DNA, neħħi l-impuritajiet tal-proteini jew estratt il-mudell tad-DNA bil-kitts tal-purifikazzjoni.

    ■ Id-denaturazzjoni tal-mudell mhix kompluta —— Żid b'mod xieraq it-temperatura tad-denaturazzjoni u ittawwal il-ħin tad-denaturazzjoni.

    ■ Degradazzjoni tal-mudell —— Ipprepara mill-ġdid il-mudell.

    A-2 Primer

    ■ Kwalità fqira ta 'primers —— Re-sintetizza l-primer.

    ■ Primer degradazzjoni ——Aliquot il-primers ta 'konċentrazzjoni għolja f'volum żgħir għall-preservazzjoni. Evita l-iffriżar u t-tidwib multipli jew il-krijo-preservazzjoni ta '4 ° C fit-tul.

    ■ Disinn mhux xieraq tal-primers (eż. It-tul tal-primer mhux biżżejjed, dimer iffurmat bejn il-primers, eċċ.) - Primers mill-ġdid (evita l-formazzjoni tad-dimer tal-primer u l-istruttura sekondarja)

    A-3 Mg2+konċentrazzjoni

    ■ Mg2+ il-konċentrazzjoni hija baxxa wisq —— Żid sewwa Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-4 Temperatura tat-tkessiħ

    ■ It-temperatura għolja ta 'l-ittemprar taffettwa l-irbit tal-primer u l-mudell. —— Naqqas it-temperatura ta 'l-ittemprar u ittejjeb il-kundizzjoni bi gradjent ta' 2 ° C.

    A-5 Ħin ta 'estensjoni

    ■ Ħin qasir ta 'estensjoni —— Żid il-ħin ta' estensjoni.

    M: Pożittiv falz

    Fenomeni: Kampjuni negattivi juru wkoll il-meded tas-sekwenza fil-mira.

    A-1 Kontaminazzjoni ta 'PCR

    ■ Kontaminazzjoni inkroċjata tas-sekwenza ta 'mira jew prodotti ta' amplifikazzjoni ——B'attenzjoni biex ma tippipepjax il-kampjun li fih is-sekwenza ta 'mira fil-kampjun negattiv jew tixridhom mit-tubu taċ-ċentrifuga. Ir-reaġenti jew it-tagħmir għandhom ikunu awtoklavati biex jeliminaw l-aċidi nuklejċi eżistenti, u l-eżistenza ta ’kontaminazzjoni għandha tiġi ddeterminata permezz ta’ esperimenti ta ’kontroll negattiv.

    ■ Kontaminazzjoni tar-reaġent ——Aliquot ir-reaġenti u aħżen f'temperatura baxxa.

    A-2 Primr

    ■ Mg2+ il-konċentrazzjoni hija baxxa wisq —— Żid sewwa Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    ■ Disinn mhux xieraq tal-primer, u s-sekwenza fil-mira għandha omoloġija mas-sekwenza mhux fil-mira. —— Primers tad-disinn mill-ġdid.

    M: Amplifikazzjoni mhux speċifika

    Fenomeni: Il-meded ta 'amplifikazzjoni tal-PCR huma inkonsistenti mad-daqs mistenni, kemm jekk kbir jew żgħir, jew kultant iseħħu kemm meded ta' amplifikazzjoni speċifiċi kif ukoll meded ta 'amplifikazzjoni mhux speċifiċi.

    A-1 Primer

    ■ Speċifiċità fqira tal-primer

    —— Primer tad-disinn mill-ġdid.

    ■ Il-konċentrazzjoni tal-primer hija għolja wisq —— Żid sew it-temperatura ta 'denaturazzjoni u ittawwal il-ħin ta' denaturazzjoni.

    A-2 Mg2+ konċentrazzjoni

    ■ Il-Mg2+ il-konċentrazzjoni hija għolja wisq —— Naqqas sew il-konċentrazzjoni ta 'Mg2 +: Ittejjeb l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-3 Polimerasi termostabbli

    ■ Ammont eċċessiv ta 'enżima —— Naqqas l-ammont ta' enżima b'mod xieraq f'intervalli ta '0.5 U.

    A-4 Temperatura tat-tkessiħ

    ■ It-temperatura ta 'l-ittemprar hija baxxa wisq —— Żid b'mod xieraq it-temperatura ta' l-ittemprar jew tadotta l-metodu ta 'l-ittemprar f'żewġ stadji

    A-5 ċikli PCR

    ■ Wisq ċikli PCR —— Naqqas in-numru ta 'ċikli PCR.

    Q: Meded irqajja 'jew imċappas

    A-1 Primer——Speċifiċità fqira —— Iddisinja mill-ġdid il-primer, ibdel il-pożizzjoni u t-tul tal-primer biex ittejjeb l-ispeċifiċità tagħha; jew wettaq PCR imqabbad.

    A-2 Template DNA

    ——Il-mudell mhuwiex pur ——Purifika l-mudell jew estratt tad-DNA bi kitts ta 'purifikazzjoni.

    A-3 Mg2+ konċentrazzjoni

    ——Mg2+ il-konċentrazzjoni hija għolja wisq —— Naqqas sew Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-4 dNTP

    ——Il-konċentrazzjoni ta ’dNTPs hija għolja wisq —— Naqqas il-konċentrazzjoni ta’ dNTP b’mod xieraq

    A-5 Temperatura ta 'l-ittemprar

    ——Temperatura baxxa wisq ta 'l-ittemprar —— Żid b'mod xieraq it-temperatura ta' l-ittemprar

    Ċikli A-6

    —— Ħafna ċikli ——Ottimizza n-numru taċ-ċiklu

    M: Kemm mudell ta 'DNA għandu jiżdied f'sistema ta' reazzjoni ta '50 μl PCR?
    ytry
    Q: Kif tkabbar frammenti twal?

    L-ewwel pass huwa li tagħżel il-polimerasa xierqa. Taq polimerasi regolari ma jistax jaqra l-provi minħabba nuqqas ta 'attività ta' exonuclease ta '3'-5', u nuqqas ta 'qbil se jnaqqas ħafna l-effiċjenza ta' estensjoni ta 'frammenti. Għalhekk, il-polimerażi regolari Taq ma tistax effettivament tkabbar frammenti fil-mira akbar minn 5 kb. Taq polimerasa b'modifika speċjali jew polimerasa oħra ta 'fedeltà għolja għandha tintgħażel biex ittejjeb l-effiċjenza ta' l-estensjoni u tissodisfa l-ħtiġijiet ta 'amplifikazzjoni ta' framment twil. Barra minn hekk, l-amplifikazzjoni ta 'frammenti twal teħtieġ ukoll aġġustament korrispondenti tad-disinn tal-primer, ħin ta' denaturazzjoni, ħin ta 'estensjoni, buffer pH, eċċ. Normalment, primers bi 18-24 bp jistgħu jwasslu għal rendiment aħjar. Sabiex tiġi evitata ħsara fil-mudell, il-ħin ta 'denaturazzjoni f'94 ° C għandu jitnaqqas għal 30 sek jew inqas kull ċiklu, u l-ħin biex titla' t-temperatura għal 94 ° C qabel l-amplifikazzjoni għandu jkun inqas minn 1 min. Barra minn hekk, l-issettjar tat-temperatura tal-estensjoni għal madwar 68 ° C u d-disinn tal-ħin tal-estensjoni skont ir-rata ta '1 kb / min jista' jiżgura amplifikazzjoni effettiva ta 'frammenti twal.

    M: Kif tista 'ttejjeb il-fedeltà tal-amplifikazzjoni tal-PCR?

    Ir-rata ta 'żball ta' amplifikazzjoni tal-PCR tista 'titnaqqas billi jintużaw diversi DNA polimerasi b'fedeltà għolja. Fost il-polimerażi tad-DNA Taq misjuba s'issa, l-enżima Pfu għandha l-inqas rata ta 'żball u l-ogħla fedeltà (ara t-tabella mehmuża). Minbarra l-għażla tal-enżimi, ir-riċerkaturi jistgħu jnaqqsu aktar ir-rata ta ’mutazzjoni tal-PCR billi jottimizzaw il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni, inkluż l-ottimizzazzjoni tal-kompożizzjoni tal-buffer, il-konċentrazzjoni tal-polimerasa termostabbli u l-ottimizzazzjoni tan-numru taċ-ċiklu tal-PCR.

    Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibagħtilna