Golden Easy PCR System (biż-żebgħa)

Sistema ta 'reazzjoni PCR sempliċi b'żewġ komponenti.

Kat. Le Daqs tal-Ippakkjar
4993003 250 U (2.5 U / μl)
4993004 500 U (2.5 U / μl)

Dettall tal-Prodott

Eżempju Sperimentali

FAQ

Tags tal-Prodott

Karatteristiċi

■ Stabbiltà tajba: Formula unika tagħmel is-sistema ta 'reazzjoni kollha stabbli ħafna. Is-sistema fiha komponenti meħtieġa għal amplifikazzjoni PCR effettiva, bħal DNA polimerasi termostabbli, dNTPs, MgCl2 u soluzzjoni buffer, kif ukoll varjetà ta 'stabilizzaturi speċjali, li jżidu bil-kbir l-istabbiltà tal-polimerasa u dNTP f'temperatura normali u 4 ℃.
■ Mgħaġġel u sempliċi: Operazzjoni sempliċi u ta 'malajr. Sempliċement ħallat iż-żewġ komponenti fi proporzjon u mbagħad żid templates u primers biex twaqqaf ir-reazzjoni, u tevita l-passi tedjanti li żżid komponenti ta 'reazzjoni PCR varji wieħed wieħed. Imminimizza l-iżbalji tal-kampjunar u l-kontaminazzjoni inkroċjata, bi ftit żball bejn lottijiet differenti, u tista 'tintuża f'esperimenti semi-kwantitattivi.
■ Applikazzjoni wiesgħa u sensittività għolja.
■ Kull sistema ta 'reazzjoni fiha żebgħa, u l-elettroforeżi tista' ssir direttament wara l-passi tal-PCR sabiex il-proċedura tkun mgħaġġla u tiffranka l-ħaddiema.

Kontroll tal-Kwalità

Il-purità ta 'SDS-PAGE hija aktar minn 99%; Ma tinstab l-ebda attività ta 'nuklease eżoġena; Ġene wieħed fil-ġenoma umana jista 'jiġi amplifikat b'mod effettiv; L-ebda bidla sinifikanti fl-attività meta tinħażen f'temperatura tal-kamra għal ġimgħa.

Stabbiltà

Il-prodott li juża s-sistema PCR sempliċi b'żewġ komponenti jista 'jinħażen f'4 ° C għal xahar mingħajr tibdil ovvju fl-attività.

Fluss tax-xogħol

Pass 1: Ħallat diversi komponenti fi proporzjon.

Pass 2: Ibda l-esperiment immedjatament.

Pass 3: Elettroforeżi diretta għat-Taħlita biż-żebgħa.

Pass 4: Riżultati sperimentali sodisfaċenti.

Final Reaction Concentration:

Il-prodotti kollha jistgħu jiġu personalizzati għal ODM / OEM. Għad-dettalji,jekk jogħġbok ikklikkja Servizz Personalizzat (ODM / OEM)


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Is-sistema PCR sempliċi b'żewġ komponenti (Golden Easy PCR System) hija applikata. Is-sistema ta 'reazzjoni hija 50 μl (Jekk is-sistemi ta' reazzjoni huma differenti, jekk jogħġbok proporzjonalment iżżid jew tnaqqas l-ammont ta 'komponenti ta' reazzjoni li jirreferu għal din is-sistema).
    Experimental Example Konċentrazzjoni tar-Reazzjoni Finali
    Q: L-ebda faxxa ta 'amplifikazzjoni

    Mudell A-1

    ■ Il-mudell fih impuritajiet tal-proteini jew inibituri tat-Taq, eċċ. ——Purifika l-mudell tad-DNA, neħħi l-impuritajiet tal-proteini jew estratt il-mudell tad-DNA bil-kitts tal-purifikazzjoni.

    ■ Id-denaturazzjoni tal-mudell mhix kompluta —— Żid b'mod xieraq it-temperatura tad-denaturazzjoni u ittawwal il-ħin tad-denaturazzjoni.

    ■ Degradazzjoni tal-mudell —— Ipprepara mill-ġdid il-mudell.

    A-2 Primer

    ■ Kwalità fqira ta 'primers —— Re-sintetizza l-primer.

    ■ Primer degradazzjoni ——Aliquot il-primers ta 'konċentrazzjoni għolja f'volum żgħir għall-preservazzjoni. Evita l-iffriżar u t-tidwib multipli jew il-krijo-preservazzjoni ta '4 ° C fit-tul.

    ■ Disinn mhux xieraq tal-primers (eż. It-tul tal-primer mhux biżżejjed, dimer iffurmat bejn il-primers, eċċ.) - Primers mill-ġdid (evita l-formazzjoni tad-dimer tal-primer u l-istruttura sekondarja)

    A-3 Mg2+konċentrazzjoni

    ■ Mg2+ il-konċentrazzjoni hija baxxa wisq —— Żid sewwa Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-4 Temperatura tat-tkessiħ

    ■ It-temperatura għolja ta 'l-ittemprar taffettwa l-irbit tal-primer u l-mudell. —— Naqqas it-temperatura ta 'l-ittemprar u ittejjeb il-kundizzjoni bi gradjent ta' 2 ° C.

    A-5 Ħin ta 'estensjoni

    ■ Ħin qasir ta 'estensjoni —— Żid il-ħin ta' estensjoni.

    M: Pożittiv falz

    Fenomeni: Kampjuni negattivi juru wkoll il-meded tas-sekwenza fil-mira.

    A-1 Kontaminazzjoni ta 'PCR

    ■ Kontaminazzjoni inkroċjata tas-sekwenza ta 'mira jew prodotti ta' amplifikazzjoni ——B'attenzjoni biex ma tippipepjax il-kampjun li fih is-sekwenza ta 'mira fil-kampjun negattiv jew tixridhom mit-tubu taċ-ċentrifuga. Ir-reaġenti jew it-tagħmir għandhom ikunu awtoklavati biex jeliminaw l-aċidi nuklejċi eżistenti, u l-eżistenza ta ’kontaminazzjoni għandha tiġi ddeterminata permezz ta’ esperimenti ta ’kontroll negattiv.

    ■ Kontaminazzjoni tar-reaġent ——Aliquot ir-reaġenti u aħżen f'temperatura baxxa.

    A-2 Primr

    ■ Mg2+ il-konċentrazzjoni hija baxxa wisq —— Żid sewwa Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    ■ Disinn mhux xieraq tal-primer, u s-sekwenza fil-mira għandha omoloġija mas-sekwenza mhux fil-mira. —— Primers tad-disinn mill-ġdid.

    M: Amplifikazzjoni mhux speċifika

    Fenomeni: Il-meded ta 'amplifikazzjoni tal-PCR huma inkonsistenti mad-daqs mistenni, kemm jekk kbir jew żgħir, jew kultant iseħħu kemm meded ta' amplifikazzjoni speċifiċi kif ukoll meded ta 'amplifikazzjoni mhux speċifiċi.

    A-1 Primer

    ■ Speċifiċità fqira tal-primer

    —— Primer tad-disinn mill-ġdid.

    ■ Il-konċentrazzjoni tal-primer hija għolja wisq —— Żid sew it-temperatura ta 'denaturazzjoni u ittawwal il-ħin ta' denaturazzjoni.

    A-2 Mg2+ konċentrazzjoni

    ■ Il-Mg2+ il-konċentrazzjoni hija għolja wisq —— Naqqas sew il-konċentrazzjoni ta 'Mg2 +: Ittejjeb l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-3 Polimerasi termostabbli

    ■ Ammont eċċessiv ta 'enżima —— Naqqas l-ammont ta' enżima b'mod xieraq f'intervalli ta '0.5 U.

    A-4 Temperatura tat-tkessiħ

    ■ It-temperatura ta 'l-ittemprar hija baxxa wisq —— Żid b'mod xieraq it-temperatura ta' l-ittemprar jew tadotta l-metodu ta 'l-ittemprar f'żewġ stadji

    A-5 ċikli PCR

    ■ Wisq ċikli PCR —— Naqqas in-numru ta 'ċikli PCR.

    Q: Meded irqajja 'jew imċappas

    A-1 Primer——Speċifiċità fqira —— Iddisinja mill-ġdid il-primer, ibdel il-pożizzjoni u t-tul tal-primer biex ittejjeb l-ispeċifiċità tagħha; jew wettaq PCR imqabbad.

    A-2 Template DNA

    ——Il-mudell mhuwiex pur ——Purifika l-mudell jew estratt tad-DNA bi kitts ta 'purifikazzjoni.

    A-3 Mg2+ konċentrazzjoni

    ——Mg2+ il-konċentrazzjoni hija għolja wisq —— Naqqas sew Mg2+ konċentrazzjoni: Ottimizza l-Mg2+ konċentrazzjoni minn serje ta 'reazzjonijiet minn 1 mM sa 3 mM b'intervall ta' 0.5 mM biex tiddetermina l-aħjar Mg2+ konċentrazzjoni għal kull mudell u primer.

    A-4 dNTP

    ——Il-konċentrazzjoni ta ’dNTPs hija għolja wisq —— Naqqas il-konċentrazzjoni ta’ dNTP b’mod xieraq

    A-5 Temperatura ta 'l-ittemprar

    ——Temperatura baxxa wisq ta 'l-ittemprar —— Żid b'mod xieraq it-temperatura ta' l-ittemprar

    Ċikli A-6

    —— Ħafna ċikli ——Ottimizza n-numru taċ-ċiklu

    M: Kemm mudell ta 'DNA għandu jiżdied f'sistema ta' reazzjoni ta '50 μl PCR?
    ytry
    Q: Kif tkabbar frammenti twal?

    L-ewwel pass huwa li tagħżel il-polimerasa xierqa. Taq polimerasi regolari ma jistax jaqra l-provi minħabba nuqqas ta 'attività ta' exonuclease ta '3'-5', u nuqqas ta 'qbil se jnaqqas ħafna l-effiċjenza ta' estensjoni ta 'frammenti. Għalhekk, il-polimerażi regolari Taq ma tistax effettivament tkabbar frammenti fil-mira akbar minn 5 kb. Taq polimerasa b'modifika speċjali jew polimerasa oħra ta 'fedeltà għolja għandha tintgħażel biex ittejjeb l-effiċjenza ta' l-estensjoni u tissodisfa l-ħtiġijiet ta 'amplifikazzjoni ta' framment twil. Barra minn hekk, l-amplifikazzjoni ta 'frammenti twal teħtieġ ukoll aġġustament korrispondenti tad-disinn tal-primer, ħin ta' denaturazzjoni, ħin ta 'estensjoni, buffer pH, eċċ. Normalment, primers bi 18-24 bp jistgħu jwasslu għal rendiment aħjar. Sabiex tiġi evitata ħsara fil-mudell, il-ħin ta 'denaturazzjoni f'94 ° C għandu jitnaqqas għal 30 sek jew inqas kull ċiklu, u l-ħin biex titla' t-temperatura għal 94 ° C qabel l-amplifikazzjoni għandu jkun inqas minn 1 min. Barra minn hekk, l-issettjar tat-temperatura tal-estensjoni għal madwar 68 ° C u d-disinn tal-ħin tal-estensjoni skont ir-rata ta '1 kb / min jista' jiżgura amplifikazzjoni effettiva ta 'frammenti twal.

    M: Kif tista 'ttejjeb il-fedeltà tal-amplifikazzjoni tal-PCR?

    Ir-rata ta 'żball ta' amplifikazzjoni tal-PCR tista 'titnaqqas billi jintużaw diversi DNA polimerasi b'fedeltà għolja. Fost il-polimerażi tad-DNA Taq misjuba s'issa, l-enżima Pfu għandha l-inqas rata ta 'żball u l-ogħla fedeltà (ara t-tabella mehmuża). Minbarra l-għażla tal-enżimi, ir-riċerkaturi jistgħu jnaqqsu aktar ir-rata ta ’mutazzjoni tal-PCR billi jottimizzaw il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni, inkluż l-ottimizzazzjoni tal-kompożizzjoni tal-buffer, il-konċentrazzjoni tal-polimerasa termostabbli u l-ottimizzazzjoni tan-numru taċ-ċiklu tal-PCR.

    Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibagħtilna