Kitt tad-DNA Ġenomiku tad-Demm TGuide

A-1 Konċentrazzjoni baxxa ta 'ċelloli jew virus fil-kampjun tal-bidu - Arrikkixxi l-konċentrazzjoni ta' ċelloli jew viruses.

A-2 Lisi insuffiċjenti tal-kampjuni —Il-kampjuni ma tħalltux sewwa mal-buffer tal-lisi. Huwa ssuġġerit li tħallat sewwa billi tħawwad il-polz għal 1-2 darbiet. —Lisi insuffiċjenti taċ-ċelloli kkawżata mit-tnaqqis fl-attività ta 'proteinase K. —Lisi insuffiċjenti taċ-ċelloli jew degradazzjoni tal-proteina minħabba ħin ta' banju sħun insuffiċjenti. Huwa ssuġġerit li tqatta 't-tessut f'biċċiet żgħar u testendi l-ħin tal-banju biex tneħħi r-residwu kollu fil-lisat.

A-3 Assorbiment insuffiċjenti tad-DNA. —L-ebda etanol jew perċentwal baxx minflok 100% etanol ma ġie miżjud qabel ma l-lisat ġie trasferit għall-kolonna spin.

A-4 Il-valur tal-pH tal-buffer ta 'elużjoni huwa baxx wisq. —Aġġusta l-pH għal bejn 8.0-8.3.

Etanol residwu fl-elwent.

—Hemm buffer tal-ħasil residwu PW fl-elwent. L-etanol jista 'jitneħħa billi tiċċentrifuga l-kolonna spin għal 3-5 min, u mbagħad titqiegħed f'temperatura tal-kamra jew inkubatur ta' 50 for għal 1-2 min.

A-1 Il-kampjun mhux frisk. —Eħroġ kampjun pożittiv tad-DNA bħala kontroll biex tiddetermina jekk id-DNA fil-kampjun iddegradatx.

A-2 Trattament minn qabel mhux xieraq. —Kkawżat minn tħin eċċessiv ta 'nitroġenu likwidu, irkupru ta' umdità, jew ammont kbir wisq tal-kampjun.

It-trattamenti minn qabel għandhom ivarjaw għal kampjuni differenti. Għal kampjuni ta 'pjanti, kun żgur li tħin sewwa fin-nitroġenu likwidu. Għal kampjuni ta 'annimali, omoġenizza jew itħan sewwa fin-nitroġenu likwidu. Għal kampjuni b'ħitan taċ-ċelloli li huma diffiċli biex jinkisru, bħal batterji G + u ħmira, huwa ssuġġerit li jintużaw lisozima, lyticase jew metodi mekkaniċi biex jiksru l-ħitan taċ-ċelloli.

4992201/4992202 Il-Kitt tad-DNA Ġenomiku tal-Pjanti jadotta metodu bbażat fuq il-kolonna li jeħtieġ kloroform għall-estrazzjoni. Huwa adattat b'mod speċjali għal diversi kampjuni ta 'pjanti, kif ukoll għal trab niexef tal-pjanti. Il-Kit tal-Pjanti Hi-DNAsecure huwa wkoll ibbażat fuq il-kolonna, iżda bl-ebda ħtieġa ta 'estrazzjoni ta' fenol / kloroform, li jagħmilha sigura u mhux tossika. Huwa adattat għal pjanti b'kontenut għoli ta 'polisakkaridi u polifenoli. 4992709/4992710 DNAquick Plant System jadotta metodu bbażat fuq il-likwidu. L-estrazzjoni tal-fenol / kloroform mhix meħtieġa wkoll. Il-proċedura ta 'purifikazzjoni hija sempliċi u mgħaġġla mingħajr limitu għall-ammonti tal-bidu tal-kampjun, sabiex l-utenti jkunu jistgħu jaġġustaw l-ammont b'mod flessibbli skont ir-rekwiżiti sperimentali. Daqs kbir ta 'frammenti ta' gDNA jista 'jinkiseb b'rendiment għoli.

Id-DNA ġenomika ġiet estratta minn volumi differenti ta 'kampjuni tad-demm sħiħ tal-bniedem permezz ta' TIANamp Blood DNA Kit. Ir-riżultati huma kif ġej. Ir-riżultati huma elenkati bħala referenza biss, ir-riżultati attwali tal-estrazzjoni jiddependu fuq il-kundizzjonijiet tal-kampjuni.

L-estrazzjoni tad-DNA ta 'emboli tad-demm tista' ssir bl-użu tar-reaġenti pprovduti f'dawn iż-żewġ settijiet billi sempliċement tbiddel il-protokoll għall-istruzzjoni speċifika għall-estrazzjoni tad-DNA ta 'emboli tad-demm. Il-kopja ratba tal-protokoll tal-estrazzjoni tad-DNA ta ’embolu tad-demm tista’ tinħareġ meta ssir it-talba.

Issospendi l-kampjun frisk b'1 ml PBS, salina normali jew buffer TE. Omoġenizza kompletament il-kampjun permezz ta 'omoġenizzatur u iġbor il-preċipitat sal-qiegħ ta' tubu billi tiċċentrifuga. Armi s-supernatant, u ssospendi mill-ġdid il-preċipitat bi 200 μl buffer GA. Il-purifikazzjoni tad-DNA li ġejja tista 'ssir skont l-istruzzjoni.

Għall-purifikazzjoni ta 'gDNA f'kampjuni ta' plażma, serum u fluwidu tal-ġisem, TIANamp Micro DNA Kit huwa rakkomandat. Għall-purifikazzjoni tal-virus gDNA minn kampjuni ta 'serum / plażma, TIANamp Virus Kit DNA / RNA huwa rakkomandat. Għall-purifikazzjoni ta 'gDNA batterjali minn kampjuni ta' serum u plażma, TIANamp Bacteria DNA Kit huwa rakkomandat (lisozima għandha tkun inkluża għal batterja pożittiva). Għal kampjuni tal-bżieq, Hi-Swab DNA Kit u TIANamp Bacteria DNA Kit huma rakkomandati.

DNAsecure Plant Kit jew DNAquick Plant System huma rrakkomandati għall-estrazzjoni tal-ġenoma fungali. Għall-estrazzjoni tal-ġenoma tal-ħmira, TIANamp Yeast DNA Kit huwa rakkomandat (lyticase għandu jkun ippreparat minnu nnifsu).