TGuide S96 Kitt tad-Demm / Ċellula / Tessut RNA

A-1 Lisi taċ-ċellula jew omoġenizzazzjoni mhux biżżejjed

---- Naqqas l-użu tal-kampjun, żid l-ammont ta 'lysis buffer, żid l-omoġenizzazzjoni u l-ħin tal-lysis.

A-2 L-ammont tal-kampjun huwa kbir wisq

---- Naqqas l-ammont ta 'kampjun użat jew żid l-ammont ta' lysis buffer.

A-1 Lisi insuffiċjenti taċ-ċelloli jew omoġenizzazzjoni

---- Naqqas l-użu tal-kampjun, żid l-ammont ta 'lysis buffer, żid l-omoġenizzazzjoni u l-ħin tal-lysis.

A-2 L-ammont tal-kampjun huwa kbir wisq

---- Jekk jogħġbok irreferi għall-kapaċità massima tal-ipproċessar.

A-3 RNA mhix elwita kompletament mill-kolonna

---- Wara li żżid ilma mingħajr RNase, ħallih għal ftit minuti qabel iċ-ċentrifugazzjoni.

A-4 Etanol fl-elwent

---- Wara t-tlaħliħ, erġa 'ċċentrifuga u neħħi kemm jista' jkun il-buffer tal-ħasil.

A-5 Il-mezz ta 'kultura taċ-ċelloli ma jitneħħiex kompletament

---- Meta tiġbor iċ-ċelloli, jekk jogħġbok kun żgur li tneħħi l-medium tal-kultura kemm jista 'jkun.

A-6 Iċ-ċelloli maħżuna fir-RNAstore mhumiex effettivament ċentrifugati

---- Id-densità tar-RNAstore hija akbar mill-medja tal-kultura taċ-ċelloli medja; għalhekk il-forza ċentrifugali għandha tiżdied. Huwa ssuġġerit li ċċentrifuga bi 3000x g.

A-7 Kontenut baxx ta 'RNA u abbundanza fil-kampjun

---- Uża kampjun pożittiv biex tiddetermina jekk ir-rendiment baxx huwiex ikkawżat mill-kampjun.

A-1 Il-materjal mhux frisk

---- It-tessuti friski għandhom jinħażnu f'nitroġenu likwidu immedjatament jew immedjatament imqiegħed fir-reaġent RNAstore biex jiġi żgurat l-effett ta 'estrazzjoni.

A-2 L-ammont tal-kampjun huwa kbir wisq

---- Naqqas l-ammont tal-kampjun.

A-3 RNase contamination

---- Għalkemm il-buffer ipprovdut fil-kitt ma fihx RNase, huwa faċli li tikkontamina RNase waqt il-proċess ta 'estrazzjoni u għandu jiġi mmaniġġjat b'attenzjoni.

A-4 Tniġġis bl-elettroforeżi

---- Ibdel il-buffer tal-elettroforeżi u kun żgur li l-konsumabbli u l-Buffer tat-Tagħbija huma ħielsa minn kontaminazzjoni RNase.

A-5 Tagħbija żejda għall-elettroforeżi

---- Naqqas l-ammont ta 'tagħbija tal-kampjun, it-tagħbija ta' kull bir m'għandhiex taqbeż 2 μg.

A-1 L-ammont tal-kampjun huwa kbir wisq

---- Naqqas l-ammont tal-kampjun.

A-2 Xi kampjuni għandhom kontenut għoli ta 'DNA u jistgħu jiġu ttrattati b'DNase.

---- Wettaq trattament ta 'DNase Ħieles mill-RNase għas-soluzzjoni ta' RNA miksuba, u l-RNA jista 'jintuża direttament għal esperimenti sussegwenti wara t-trattament, jew jista' jiġi purifikat aktar minn kitts ta 'purifikazzjoni ta' RNA.

Għal oġġetti tal-ħġieġ, moħmija f'150 ° C għal 4 sigħat. Għal kontenituri tal-plastik, mgħaddsa f'0.5 M NaOH għal 10 min, imbagħad laħlaħ sewwa b'ilma ħieles minn RNase u mbagħad sterilizza biex tneħħi kompletament RNase. Ir-reaġenti jew is-soluzzjonijiet użati fl-esperiment, speċjalment l-ilma, għandhom ikunu ħielsa minn RNase. Uża ilma ħieles mill-RNase għall-preparazzjonijiet kollha tar-reaġent (żid ilma ma 'flixkun tal-ħġieġ nadif, żid DEPC għal konċentrazzjoni finali ta' 0.1% (V / V), ħawwad matul il-lejl u awtoklavi).